【實(shí)用】免疫共沉淀Co-IP實(shí)驗(yàn)：1分鐘解鎖IP-MS送樣全流程

做Co-IP MS實(shí)驗(yàn)的你，是否總被兩大難題困?。磕繕?biāo)蛋白洗脫回收率慘淡，辛苦做的樣本還沒(méi)上質(zhì)譜就被污染，實(shí)驗(yàn)反復(fù)翻車(chē)、耗時(shí)耗力？

其實(shí)核心關(guān)鍵就藏在「洗脫后到送樣」的全流程里！不用再查繁雜文獻(xiàn)、不用向師兄師姐反復(fù)請(qǐng)教，輝駿生物直接上視頻實(shí)操，1分鐘手把手教會(huì)你Co-IP送質(zhì)譜檢測(cè)全流程——從洗脫操作到樣本運(yùn)輸，每一步都清晰呈現(xiàn)，新手也能跟著鏡頭一步步做，精準(zhǔn)避開(kāi)所有實(shí)驗(yàn)坑，讓你的實(shí)驗(yàn)一次成功！

關(guān)鍵操作要點(diǎn)?：

1. ?洗脫后處理?：磁吸分離要快，上清液及時(shí)收集，減少蛋白二次吸附或降解。

?2. 全程低溫保護(hù)?：樣品4℃操作，加蛋白酶抑制劑，防降解。

3?. 送樣前確認(rèn)?：檢查樣本體積、濃度，標(biāo)記清晰（名稱(chēng)、濃度、處理方式），密封后低溫運(yùn)輸。

?4. 避免污染?：洗脫液別含高濃度去污劑、強(qiáng)還原劑等質(zhì)譜禁忌成分。

輝駿生物提供的Co-IP免疫共沉淀服務(wù)分為以下兩種：

1. Co-IP WB，用于檢測(cè)某樣本中的誘餌蛋白和待測(cè)蛋白是否存在相互作用；

2. Co-IP MS，用于篩選某樣本中的誘餌蛋白與哪些蛋白具有相互作用。

Co-IP（免疫共沉淀）檢測(cè)服務(wù)
服務(wù)項(xiàng)目	服務(wù)內(nèi)容	結(jié)果交付	實(shí)驗(yàn)周期	客戶(hù)提供	價(jià)格
Co-IP WB	Western blot檢測(cè)樣本（input）中的誘餌蛋白和待測(cè)蛋白	Western blot檢測(cè)圖	3-4周	1、實(shí)驗(yàn)樣本 2、誘餌蛋白的IP級(jí)抗體 3、待測(cè)蛋白抗體 4、實(shí)驗(yàn)信息表（樣本信息、抗體信息、誘餌蛋白和待測(cè)蛋白序列）	點(diǎn)擊詢(xún)價(jià)
	Co-IP調(diào)取誘餌蛋白及其互作蛋白（2組：實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組）	CoIP實(shí)驗(yàn)報(bào)告
	Western blot檢測(cè)Co-IP產(chǎn)物中的誘餌蛋白和待測(cè)蛋白	Western blot檢測(cè)圖
Co-IP MS	Western blot檢測(cè)樣本（input）中的誘餌蛋白	Western blot檢測(cè)圖	5-6周	1、實(shí)驗(yàn)樣本 2、誘餌蛋白的IP級(jí)抗體 3、實(shí)驗(yàn)信息表（樣本信息、抗體信息、誘餌蛋白序列）	點(diǎn)擊詢(xún)價(jià)
	Co-IP調(diào)取誘餌蛋白及其互作蛋白（2組：實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組）	CoIP實(shí)驗(yàn)服務(wù)報(bào)告
	Western blot檢測(cè)Co-IP產(chǎn)物中的誘餌蛋白	Western blot檢測(cè)圖
	LC-MS/MS定性檢測(cè)Co-IP產(chǎn)物的蛋白、篩選實(shí)驗(yàn)組獨(dú)有蛋白（潛在互作蛋白）	質(zhì)譜檢索表格、互作蛋白篩選表格、檢測(cè)報(bào)告
	針對(duì)互作蛋白做生物信息學(xué)分析（GO、KEGG pathway、String）	生物信息學(xué)分析結(jié)果和報(bào)告	1周

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CoIP實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)樣本要求

1. 送樣量要求

樣本類(lèi)型	Co-IP WB 建議送樣量	Co-IP MS 建議送樣量
動(dòng)物細(xì)胞	3*10e7個(gè)細(xì)胞/組（約3個(gè)10cm皿）	5*10e7個(gè)細(xì)胞/組（約5個(gè)10cm皿）
動(dòng)物組織	1g/組	2g/組
植物葉片	2g/組	4g/組
植物根或果實(shí)	4g/組	8g/組
菌體	50ul菌體沉淀/組	100ul菌體沉淀/組

▲注意：表列出的均為每組樣本的送樣量，如果實(shí)驗(yàn)和對(duì)照組用的樣本一致，此樣本量*2。詳細(xì)送樣指南聯(lián)系輝駿生物客服或銷(xiāo)售索取

免疫共沉淀CoIP實(shí)驗(yàn)服務(wù)—輝駿生物客戶(hù)文章

1. Li H.B. et al: The plant ESCRT component FREE1 shuttles to the nucleus to attenuate abscisic acid signaling. Nature Plants. 2019，IF=17.352.
【研究?jī)?nèi)容】：客戶(hù)發(fā)現(xiàn)，作為內(nèi)體蛋白分選轉(zhuǎn)運(yùn)復(fù)合體成分之一的FREE1基因，受到脫落酸刺激時(shí)候會(huì)發(fā)生磷酸化并移位到細(xì)胞核?？蛻?hù)利用酵母雙雜交技術(shù)找到兩個(gè)核蛋白ABF4 and ABI5會(huì)與FREE1結(jié)合，免疫共沉淀CoIP實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了FREE與這兩個(gè)蛋白的互作。后續(xù)實(shí)驗(yàn)表明，F(xiàn)REE1通過(guò)抑制ABF4、ABI5對(duì)下游基因的調(diào)控能力，參與了脫落酸信號(hào)通路。
使用相關(guān)技術(shù)：質(zhì)譜鑒定、免疫共沉淀CoIP、Co-IP MS實(shí)驗(yàn)

2. Jiang, S. et al: Cholesterol Induces Epithelial-to-Mesenchymal Transition of Prostate Cancer Cells by Suppressing Degradation of EGFR through APMAP. Cancer Research.2019，IF= 13.312.
【研究?jī)?nèi)容】：客戶(hù)利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，篩選出膽固醇致前列腺癌發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)變（EMT）的重要基因APMAP和EGFR。通過(guò)在前列腺癌細(xì)胞表達(dá)3*Flag-APMAP基因，并利用免疫共沉淀CoIP及質(zhì)譜鑒定技術(shù)，客戶(hù)發(fā)現(xiàn)EPS15R可與APMAP結(jié)合。進(jìn)一步的研究證實(shí)，體內(nèi)EPS15R-APMAP復(fù)合物通過(guò)EGFR致使細(xì)胞發(fā)生EMT。
使用相關(guān)技術(shù)：蛋白質(zhì)組學(xué)、質(zhì)譜鑒定、免疫共沉淀CoIP

3. Huang C.Y. et al: UBAP2L arginine methylation by PRMT1 modulates stress granule assembly. Cell Death Differ. 2020 , IF=12.067.
【研究?jī)?nèi)容】：前期研究表明UBAP2L蛋白參與應(yīng)激顆粒形成?？蛻?hù)在這項(xiàng)研究中，用免疫共沉淀結(jié)合質(zhì)譜等技術(shù)，發(fā)現(xiàn)PRMT1甲基化UBAP2L，UBAP2L蛋白并且和另外三個(gè)應(yīng)激顆粒形成有關(guān)的重要蛋白有相互作用。這些蛋白復(fù)合物介導(dǎo)了應(yīng)激顆粒的形成。
使用相關(guān)技術(shù)：CoIP技術(shù)服務(wù)、質(zhì)譜鑒定、修飾位點(diǎn)鑒定

標(biāo)簽：coip實(shí)驗(yàn) 質(zhì)譜送樣免疫共沉淀Co-IP實(shí)驗(yàn) IP-MS送樣全流程 IP-MS樣本制備 IP-MS技術(shù)服務(wù)

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