做Co-IP實驗總踩坑？背景臟到看不清條帶、辛苦捕獲的目標條帶莫名消失？其實關鍵癥結就藏在磁珠清洗步驟里！

不用再反復調(diào)試實驗參數(shù)、糾結清洗細節(jié)，輝駿生物直接上視頻實操，1分鐘手把手教會你Co-IP磁珠清洗全流程——每一步操作清晰拆解，動作要領精準標注，新手也能跟著鏡頭一步步做，輕松搞定清洗難題，杜絕背景污染、目標條帶丟失，讓實驗一次出好結果！

實驗必記小Tips，速存?zhèn)溆茫?/strong>

1?? 漂洗緩沖液提前預冷至4℃，實驗全程冰上/4℃環(huán)境操作，有效防止蛋白降解；

2?? 加入緩沖液后輕柔顛倒混勻，嚴禁劇烈渦旋，保護磁珠完整性，避免影響蛋白結合；

3?? 嚴格遵循“磁吸-棄上清-加液”標準流程，確保磁珠完全吸附，不造成樣本損耗；

4?? 規(guī)范清洗3次，最后一輪務必吸凈上清，最大程度降低實驗干擾；

5?? 每次清洗時長控制在1分鐘，平衡清洗效果與蛋白結合穩(wěn)定性，避免結合丟失；

6?? 按需調(diào)整緩沖液鹽濃度，高鹽環(huán)境可有效減少非特異性結合，降低實驗背景。

輝駿生物提供的Co-IP免疫共沉淀服務分為以下兩種：

1. Co-IP WB，用于檢測某樣本中的誘餌蛋白和待測蛋白是否存在相互作用；

2. Co-IP MS，用于篩選某樣本中的誘餌蛋白與哪些蛋白具有相互作用。

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CoIP實驗技術服務樣本要求

1. 送樣量要求

▲注意：表列出的均為每組樣本的送樣量，如果實驗和對照組用的樣本一致，此樣本量*2。詳細送樣指南聯(lián)系輝駿生物客服或銷售索取

免疫共沉淀CoIP實驗服務—輝駿生物客戶文章

1. Li H.B. et al: The plant ESCRT component FREE1 shuttles to the nucleus to attenuate abscisic acid signaling. Nature Plants. 2019，IF=17.352. 【研究內(nèi)容】：客戶發(fā)現(xiàn)，作為內(nèi)體蛋白分選轉運復合體成分之一的FREE1基因，受到脫落酸刺激時候會發(fā)生磷酸化并移位到細胞核。客戶利用酵母雙雜交技術找到兩個核蛋白ABF4 and ABI5會與FREE1結合，免疫共沉淀CoIP實驗進一步證實了FREE與這兩個蛋白的互作。后續(xù)實驗表明，F(xiàn)REE1通過抑制ABF4、ABI5對下游基因的調(diào)控能力，參與了脫落酸信號通路。 使用相關技術：質譜鑒定、免疫共沉淀CoIP、Co-IP MS實驗

2. Jiang, S. et al: Cholesterol Induces Epithelial-to-Mesenchymal Transition of Prostate Cancer Cells by Suppressing Degradation of EGFR through APMAP. Cancer Research.2019，IF= 13.312. 【研究內(nèi)容】：客戶利用蛋白質組學技術，篩選出膽固醇致前列腺癌發(fā)生上皮間質轉變（EMT）的重要基因APMAP和EGFR。通過在前列腺癌細胞表達3*Flag-APMAP基因，并利用免疫共沉淀CoIP及質譜鑒定技術，客戶發(fā)現(xiàn)EPS15R可與APMAP結合。進一步的研究證實，體內(nèi)EPS15R-APMAP復合物通過EGFR致使細胞發(fā)生EMT。 使用相關技術：蛋白質組學、質譜鑒定、免疫共沉淀CoIP

3. Huang C.Y. et al: UBAP2L arginine methylation by PRMT1 modulates stress granule assembly. Cell Death Differ. 2020 , IF=12.067. 【研究內(nèi)容】：前期研究表明UBAP2L蛋白參與應激顆粒形成?？蛻粼谶@項研究中，用免疫共沉淀結合質譜等技術，發(fā)現(xiàn)PRMT1甲基化UBAP2L，UBAP2L蛋白并且和另外三個應激顆粒形成有關的重要蛋白有相互作用。這些蛋白復合物介導了應激顆粒的形成。 使用相關技術：CoIP技術服務、質譜鑒定、修飾位點鑒定